## 产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具备以下特点：

1. 即开即用：用户只需提供样品DNA模板，便可快速启动检测。

2. 高灵敏度：经过优化的引物和其他组分使得本试剂盒具有极高的灵敏度。

3. 附带阳性对照：提供阳性对照样品，便于检测假阴性结果。

4. 高特异性：引物依据中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区域设计，避免与其他生物样本DNA交叉反应。

5. 多功能检测：可用于定性及定量检测，定量检测时的线性范围至少为5个数量级。

6. 充足的反应次数：本产品足以支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. 仅供科研使用。

## 方法

### 一、DNA提取（样本制备区）

使用自选方法提取和纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

### 二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

由于阳性对照浓度较高，以下稀释操作需在独立区域进行，以避免污染样品或试剂盒其他成分。

1. 准备6个标记离心管，分别编号为7、6、5、4、3、2。

2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O，建议使用带芯枪头。

3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放置于冰上待用。

4. 使用新枪头，向6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照（上一操作所得），充分震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品，放置于冰上待用。

5. 重复上述步骤，直到得到6个不同稀释度的标准曲线样品，放置于冰上待用。如不需制作标准曲线，可直接将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL。

### 三、试剂配制（试剂准备区）

根据待检样品数N，准备N+2个qPCR管（具体为待检样品数+1个阴性对照+6个阳性对照），向各PCR管中添加对应成分（详见说明书，可向尊龙凯时索取）。

### 四、添加模板（模板添加区）

向每个qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照。离心30秒，立即进行扩增反应。

### 五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器中对应的位置，进行扩增。扩增程序详见说明书，可向尊龙凯时咨询。

### 六、结果分析

1. 若制作标准曲线，则以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴，绘制标准曲线。根据待测样品的Ct值从标准曲线推算出样品DNA浓度的log值。

2. 若未制作标准曲线，按照以下标准判定结果：阳性对照应有Ct值<30，出现明显指数增长，呈现振幅S型曲线；阴性对照应有Ct值38或无Ct值、没有明显指数增长；样本检测：Ct值<35并出现明显指数增长，则样本阳性；Ct值38或无Ct值则为阴性；如果Ct值在35-38范围则建议重新检测。

## 运输及保存

本产品需在低温环境下运输，保存温度为-20℃，有效期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。

选择尊龙凯时，为您提供高效便捷的科学检测解决方案。